斜带石斑鱼Ctrp9的分子克隆、鉴定和功能研究
杨国坤， 秦超彬，宋芹芹，孙彩云，李文笙*
有害生物控制与资源利用国家重点实验室，中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室，广东省重要经济鱼类健康养殖工程技术研究中心，南海生物资源开发与利用协同创新中心中山大学生命科学学院，广东 广州 510275
脂肪组织不仅是重要的能量器官，而且是重要的内分泌器官，能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子，比如脂联素（Adiponectin）。Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能。CTRP9作为adiponectin的同源类似物，具有类似的生理功能。在本研究中，我们首次从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)克隆得到了CTRP9的全长基因序列。荧光定量PCR结果表明在正常生理状态下，CTRP9主要在肾脏和脑区中表达；在饥饿状态下，肝脏的CTRP9的mRNA水平与正常投喂组相比有非常显著的下降，再投喂后回复正常水平，但脂肪组织中的表达变化不明显，表明CTRP9在不同能量状态和组织中的表达模式不同。通过制备重组CTRP9蛋白和多克隆抗血清开展Pull-down实验，确定了斜带石斑鱼存在内源性的CTRP9蛋白。腹腔注射CTRP9的实验表明其对脂肪组织中脂肪分化相关基因和下丘脑中摄食相关基因具有调控作用。在原代培养肝脏细胞和脂肪细胞的研究进一步验证CTRP9调控葡萄糖和脂肪代谢相关基因的表达。在对罗非鱼进行腹腔注射CTRP9的实验中我们还发现CTRP9对下丘脑、垂体和性腺中生殖相关基因的表达具有调控作用。CTRP9对鱼类糖脂代谢和生殖活动调控的机制将有待进一步研究。
致谢：国家自然科学基金项目（31272639），广东省海洋与渔业局海港建设和渔业产业专项(A201601C02) ，广东省科技计划项目(2015A020216006)，高校基本科研业务费重大项目和前沿新兴交叉学科培育资助计划(17lgjc18).
关键词：CTRP9，克隆，代谢，生殖，斜带石斑鱼
杨国坤， 秦超彬，宋芹芹，孙彩云，李文笙*
有害生物控制与资源利用国家重点实验室，中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室，广东省重要经济鱼类健康养殖工程技术研究中心，南海生物资源开发与利用协同创新中心中山大学生命科学学院，广东 广州 510275
脂肪组织不仅是重要的能量器官，而且是重要的内分泌器官，能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子，比如脂联素（Adiponectin）。Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能。CTRP9作为adiponectin的同源类似物，具有类似的生理功能。在本研究中，我们首次从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)克隆得到了CTRP9的全长基因序列。荧光定量PCR结果表明在正常生理状态下，CTRP9主要在肾脏和脑区中表达；在饥饿状态下，肝脏的CTRP9的mRNA水平与正常投喂组相比有非常显著的下降，再投喂后回复正常水平，但脂肪组织中的表达变化不明显，表明CTRP9在不同能量状态和组织中的表达模式不同。通过制备重组CTRP9蛋白和多克隆抗血清开展Pull-down实验，确定了斜带石斑鱼存在内源性的CTRP9蛋白。腹腔注射CTRP9的实验表明其对脂肪组织中脂肪分化相关基因和下丘脑中摄食相关基因具有调控作用。在原代培养肝脏细胞和脂肪细胞的研究进一步验证CTRP9调控葡萄糖和脂肪代谢相关基因的表达。在对罗非鱼进行腹腔注射CTRP9的实验中我们还发现CTRP9对下丘脑、垂体和性腺中生殖相关基因的表达具有调控作用。CTRP9对鱼类糖脂代谢和生殖活动调控的机制将有待进一步研究。
致谢：国家自然科学基金项目（31272639），广东省海洋与渔业局海港建设和渔业产业专项(A201601C02) ，广东省科技计划项目(2015A020216006)，高校基本科研业务费重大项目和前沿新兴交叉学科培育资助计划(17lgjc18).
关键词：CTRP9，克隆，代谢，生殖，斜带石斑鱼